- 產品品牌： REAGEN
- 產品貨號： RN090FP
- 產品規(guī)格： 50/100T
- 產品適用： 本試劑盒適用于結核感染的定性檢測，檢測結果可用于結核分枝桿菌感染的輔助診斷。
- 產地來源： 深圳
- 保質期： 12個月
【產品名稱】
通用名稱：結核分枝桿菌核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【包裝規(guī)格】
100人份/盒
【預期用途】
本試劑盒適用于檢測痰液樣本中的結核分枝桿菌（TB）DNA，可用于結核感染的定性檢測，檢測結果可用于結核分枝桿菌感染的輔助診斷。
【檢驗原理】
本試劑盒采用聚合酶鏈式反應（PCR）結合Taqman技術，對結核分枝桿菌（Mycobacterium tuberculosis）的特異性DNA核酸片段進行熒光PCR檢測。
【主要成分】
組分成分 | 100人份/盒 | 主要成分 | |
規(guī)格 | 數(shù)量 | ||
PCR反應液 |
1887μL /管 | 1管 | 引物、探針、脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP）、緩沖體系 |
酶混合液 | 52μL /管 | 1管 | Taq酶、UDG酶 |
陽性對照 | 200μL /管 | 1管 | 含目的片段的質粒 |
陰性對照 | 500μL /管 | 1管 | 生理鹽水 |
內部質控品 | 105μL /管 | 1管 | 質粒 |
【儲存條件及有效期】
試劑置于-30~-15℃避光保存，有效期為12個月。本產品反復凍融應不超過5次。
【適用儀器】
熒光定量PCR儀：ABI 7500熒光PCR儀.；ABI Quantstudio5 ；Gentier 96R；SLAN-96P全自動醫(yī)用PCR分析系統(tǒng)。
【樣本要求】
1.適用樣本類型：痰液
2.樣本采集
以清晨第一口痰為宜，先用清水漱口，囑咐患者用力咳出深部的痰于無菌保存管，密封，即可送檢。
3.樣本保存與運送：
上述采集的樣本可立即用于檢測，或2-8℃保存（不超過24小時），長期保存請置于-20℃。標本運送用冰壺加冰或泡沫箱加冰密封進行運輸。
【檢驗方法】
1. 樣本處理
取待測樣本200ul，按照核酸提取試劑盒說明書進行核酸提取。
2. 試劑配置（在準備區(qū)進行，與擴增區(qū)分開，冰上操作）
注：試劑使用前要完全解凍，使用前渦旋混勻，10000 rpm離心5 s，確保試劑完全離心至管底，否則會出現(xiàn)裝量差異的現(xiàn)象。若有N個待檢測樣本，則需配置N+2擴增反應（待檢樣本數(shù)N+1個陽性質控品+1個陰性質控品），按下表要求進行擴增反應液的配制，配制完成后充分震蕩混勻，10000 rpm離心5 s。按每管20 μl分裝至0.2 ml PCR管中，并做好標記，擴增反應液需現(xiàn)配現(xiàn)用。
N人份(μL) | |
PCR反應液 | （N+2）×18.5 |
內部質控品 | （N+2）×1 |
酶混合液 | （N+2）×0.5 |
總量 | （N+2）×20 |
3. 加樣（在樣品處理區(qū)進行，冰上操作）
按陰性質控品、待測樣品、陽性質控品的加樣順序，分別取5μL，加入至已分裝擴增反應液的八聯(lián)管中，反應總體系為25μL。蓋緊管蓋，短暫離心后置于熒光定量PCR儀中，并記錄樣本擺放順序。
4. 擴增反應（在擴增區(qū)進行）
選擇FAM通道檢測結核分枝桿菌核酸，選擇CY5通道檢測內標。按以下擴增程序表設置PCR擴增參數(shù)。
步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) | |
1 | 預變性 | 95℃ | 3min | 1 |
3 | 變性 | 95℃ | 10sec | 45cycle |
4 | 退火延伸及熒光檢測 | 60℃ | 30 sec | |
報告熒光：FAM、CY5；淬滅熒光：NONE。 | ||||
5.質量控制
FAM通道Ct值 | CY5通道Ct值（內部質控品） | |
陰性對照 | UNDET | ≤35 |
陽性對照 | ≤35 | — |
以上要求需在同一次實驗中同時滿足，否則，本次實驗無效，需重新進行。
6.結果判讀
反應結束自動保存結果，根據(jù)分析后圖像調節(jié)Baseline 的Start 值、End 值以及Threshold 值（可以根據(jù)實際情況自行調整，Start 值可以在3~15、End 值可設在5~20，調整陰性對照的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊Analysis 自動獲得分析結果，在Report 界面觀看結果。
試驗結果判斷
FAM通道 | CY5通道 | 結果判定 | |
1 | Ct值>40 | Ct值<35 | 陰性 |
2 | Ct值≤40 | 有或無擴增曲線 | 陽性 |
3 | Ct值>40 | Ct值>35 | 復檢：重新取樣檢測 |
【檢驗結果的解釋】
1．實驗室環(huán)境污染，試劑污染，樣品交叉污染會出現(xiàn)假陽性結果，如陰性對照檢測為陽性，則需做進一步實驗來確認是哪類污染。如為試劑污染，需開封新的試劑盒再次進行實驗；如為樣品交叉污染，應重復實驗；如為實驗室環(huán)境污染，需對實驗室進行徹底清潔或更換實驗室再進行實驗。
2．試劑運輸、保存或配制不當會引起試劑檢測性能下降，出現(xiàn)假陰性結果。如陽性對照檢測為陰性，應開封新的試劑盒再進行實驗。
【檢測方法的局限性】
1. 該試劑盒僅為定性產品，不做定量測定。
2. 該試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床診治應結合其癥狀或體征、病史、其它實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。
3. 當樣本的細菌含量低于最低檢出限時，可能會出現(xiàn)假陰性。陰性結果僅說明提取的核酸濃度低于該試劑盒的檢測極限，但不能完全排除細菌感染的可能。
【產品性能指標】
1.準確性：企業(yè)陽性參考品檢測結果全部為陽性，陽性率為15/15。
2.最低檢測限：該試劑盒最低檢測限為500copies/mL。
【注意事項】
1．請嚴格按照操作步驟操作，試劑配制和加樣等步驟請嚴格按照說明書要求在冰上操作。
2．試劑配制建議在試劑配制區(qū)進行，樣品處理要求在生物安全柜內操作。臨床實驗室應嚴格按照《醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》等有關分子生物學實驗室、臨床基因擴增實驗室的管理規(guī)范執(zhí)行。
3．反應液中的成分對光敏感，應避光保存。反復凍融可能降低試劑盒靈敏度，請按檢測頻次將反應液以適當體積分管保存。
4．反應結束后，擴增管請置于密封袋內丟棄，當日清理，切忌開蓋。
5．不同批號試劑請勿混合使用，請在有效期內使用試劑盒。
6. 本品僅用于體外診斷。